提示词描述

生成一份技术路线图，以简化和组织实验描述，使其更清晰。主题是研究14-3-3β在食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞缺氧应激中的下调机制及其在促进ESCC进展中的作用。1. 确认HIF1A与14-3-3β之间的关系。相关实验包括不同COCL2浓度和诱导时间下HIF1A和14-3-3β的变化，诱导后14-3-3β mRNA水平的变化，以及敲低HIF1A和添加HIF1A抑制剂PX-478后14-3-3β的变化。2. ESCC细胞中14-3-3β的表型验证，包括MTT实验、qPCR和克隆形成实验。3. 研究14-3-3β与线粒体之间的关系，包括ROS检测、自噬水平、线粒体膜电位和ATP水平的变化。4. 检查14-3-3β与ETFA之间的关系，包括共免疫沉淀（co-IP）、线粒体分离、核质分离以及线粒体和细胞质蛋白的共免疫沉淀。5. 阐明14-3-3β和ETFA的作用机制及其对线粒体功能的影响，包括敲低14-3-3β后ETFA蛋白和mRNA水平的变化，细胞质ETFA水平的变化，线粒体耗氧量，β-脂肪酸的变化，以及铁死亡相关指标的变化。6. 体内实验：CDX和抑制剂诱导，肿瘤体积变化，免疫组化（IHC）和组织芯片。