提示词描述

从大肠杆菌包涵体中提取和纯化重组人胰岛素的总体流程如下：首先，通过发酵和诱导表达获得含有胰岛素原融合蛋白的包涵体。随后，细胞被裂解，包涵体被回收，然后进行洗涤以去除杂质。接下来，使用高浓度变性剂（如尿素）溶解包涵体，并进行氧化亚磺解以保持胰岛素原处于未折叠状态，防止错误的二硫键形成。然后，使用溴化氰（CNBr）切割N端融合肽。之后进行缓冲液交换以去除反应试剂。胰岛素原随后通过色谱方法（如离子交换、反相色谱等）和/或pH沉淀和锌结晶等方法进行纯化。纯化后，进行复性以恢复其天然构象。随后，使用胰蛋白酶和羧肽酶B进行酶解，去除C肽，生成具有生物活性的双链胰岛素结构。最后，进行进一步的色谱纯化和制剂步骤，以获得高纯度的重组人胰岛素或类似物产品。