提示词描述

**标题：** 利用邻近标记技术解析介导LNP溶酶体逃逸的宿主蛋白互作 **关键科学问题：** 1. LNP的脂质成分如何特异性地影响其溶酶体逃逸效率？是否存在决定逃逸效率的关键脂质结构特征？ 2. 哪些宿主细胞蛋白在溶酶体逃逸的关键时空节点与LNP发生功能性互作？这些互作蛋白如何介导或阻碍逃逸过程？ **研究方法：** 首先，构建多组分脂质库，并在LLC-luc细胞中使用Siluc报告系统进行筛选，以鉴定具有显著不同溶酶体逃逸效率的“高逃逸”和“低逃逸”LNP。利用共聚焦显微镜动态追踪LNP的亚细胞定位，精确确定其逃逸时间窗口。随后，在逃逸的关键时间点，使用Ce6光激活邻近标记技术，对LNP附近的宿主蛋白进行时空标记，并通过质谱分析鉴定互作蛋白群。通过比较高逃逸和低逃逸LNP的差异互作蛋白，筛选候选调控蛋白。最后，利用CRISPR-Cas9基因敲除技术验证关键蛋白在LNP溶酶体逃逸中的功能作用。 **预期结论：** 本研究有望建立LNP脂质组成与溶酶体逃逸效率之间的直接关联图谱，揭示影响逃逸效率的关键脂质化学特征。首次在溶酶体逃逸的精确时空节点捕获LNP与宿主蛋白之间的动态互作网络，并鉴定出若干介导或阻碍逃逸过程的关键宿主因子（如特定的膜融合蛋白、脂质转移蛋白或离子通道）。这些发现将阐明LNP溶酶体逃逸的分子机制，为高效递送系统的合理设计提供理论基础和新的工程靶点，并促进核酸药物递送技术的发展。