提示词描述

2.2 明确重楼皂苷Ⅲ对不同分型的乳腺癌细胞作用机制的关键分子机制 ① 基于前期敏感性差异结果，选取MCF-7（Luminal A）、BT-474（Luminal B）、SK-BR-3（HER2-enriched）和MDA-MB-231（TNBC）四株细胞，采用RNA-seq技术系统比较重楼皂苷Ⅲ处理前后各亚型的转录组变化，聚焦凋亡、氧化应激及亚型特异信号通路（如ER、HER2、STAT3）的富集情况，筛选关键差异基因；结合Western blotting和qRT-PCR验证候选靶点（如Bcl-2家族成员、NOXA、PUMA、EGFR、p-STAT3等）的表达变化，锁定各亚型中响应最显著的核心效应分子；② 针对各亚型主导机制开展功能干预实验：在TNBC中设置对照组、重楼皂苷组、NAC（ROS清除剂）组及重楼皂苷+NAC组，检测凋亡（Cleaved Caspase-3/PARP）、ROS水平、线粒体膜电位及JNK/p38磷酸化状态；在HER2⁺细胞中设置对照组、重楼皂苷组、HER2过表达/敲低组，评估HER2-AKT/ERK通路活性及细胞存活率；在Luminal A细胞中联合ER抑制剂（氟维司群）或ERα siRNA，观察是否逆转耐药；同时通过Annexin V/PI流式、细胞周期分析及划痕/Transwell实验评估功能表型变化；③ 构建关键节点基因（如HIF-1α、STAT3或HER2）的稳定敲除或过表达细胞系，验证其在重楼皂苷Ⅲ诱导的细胞死亡、信号抑制及表型改变中的必要性，并检测相关蛋白泛素化或亚细胞定位变化，从而确立各亚型中驱动药效差异的核心分子机制轴。