提示詞描述

產生一份技術路線圖，簡化並組織實驗描述以提高清晰度。主題為研究食道鱗狀細胞癌（ESCC）細胞在缺氧壓力下14-3-3β的下調機制及其在促進ESCC進展中的作用。1. 確認HIF1A和14-3-3β之間的關係。相關實驗包括不同COCL2濃度和誘導時間下HIF1A和14-3-3β的變化、誘導後14-3-3β mRNA水平的變化，以及HIF1A敲低和添加HIF1A抑制劑PX-478後14-3-3β的變化。2. 14-3-3β在ESCC細胞中的表型驗證，包括MTT測定、qPCR和集落形成測定。3. 研究14-3-3β和線粒體之間的關係，包括ROS檢測、自噬水平、線粒體膜電位和ATP水平的變化。4. 檢驗14-3-3β和ETFA之間的關係，包括共免疫沉澱（co-IP）、線粒體分離、核質分離，以及線粒體和細胞質蛋白的共免疫沉澱。5. 闡明14-3-3β和ETFA的作用機制及其對線粒體功能的影響，包括14-3-3β敲低後ETFA蛋白和mRNA水平的變化、細胞質ETFA水平的變化、線粒體耗氧量、β-脂肪酸的變化，以及鐵死亡相關指標的變化。6. 體內實驗：CDX和抑制劑誘導、腫瘤體積變化、免疫組織化學（IHC）和組織微陣列。