提示詞描述

從大腸桿菌包涵體中提取和純化重組人類胰島素的總體流程如下：首先，通過發酵和誘導表達獲得含有胰島素原融合蛋白的包涵體。隨後，細胞被裂解，包涵體被回收，然後進行洗滌以去除雜質。接下來，使用高濃度變性劑（如尿素）溶解包涵體，並進行氧化亞磺解以保持胰島素原處於未摺疊狀態，並防止錯誤的二硫鍵形成。然後，使用溴化氰（CNBr）切割N端融合肽。之後進行緩衝液置換以去除反應試劑。然後通過色譜方法（如離子交換、反相色譜等）和/或pH沉澱和鋅結晶等方法純化胰島素原。純化後，進行重摺疊以恢復其天然構象。隨後，使用胰蛋白酶和羧肽酶B進行酶解，去除C肽，生成具有生物活性的雙鏈胰島素結構。最後，進行進一步的色譜純化和配製步驟，以獲得高純度的重組人類胰島素或類似物產品。