提示詞描述
構建的重組質粒被導入大腸桿菌宿主菌株。常用的宿主菌株如BL21(DE3)或DH5α被使用,並且重組質粒通過熱休克或電穿孔導入細菌細胞。質粒進入細胞後,培養細菌溶液,並篩選抗性菌落以確認轉化成功。隨後,重組菌株在營養培養基中大規模培養。
在表達階段,添加誘導劑以啟動蛋白質表達。例如,常用的IPTG可以誘導攜帶T7啟動子的基因高效表達;早期的生產方法也使用色氨酸啟動子(trp啟動子),其在色氨酸耗盡後自動表達胰島素前體。總之,通過優化表達條件和培養基配方,可以在大腸桿菌中獲得高水平的胰島素A鏈和B鏈(或前體蛋白)。