提示詞描述

**標題：** 利用鄰近標記技術解析宿主蛋白交互作用介導的LNP溶酶體逃逸 **關鍵科學問題：** 1. LNP的脂質成分如何具體影響其溶酶體逃逸效率？是否存在決定逃逸效率的關鍵脂質結構特徵？ 2. 哪些宿主細胞蛋白在溶酶體逃逸的關鍵時空節點上與LNP發生功能性交互作用？這些交互作用蛋白如何介導或阻礙逃逸過程？ **研究方法：** 首先，將構建一個多組分脂質庫，並在LLC-luc細胞中使用Siluc報告系統進行篩選，以鑑定出具有顯著不同溶酶體逃逸效率的「高逃逸」和「低逃逸」LNP。將使用共聚焦顯微鏡動態追蹤LNP的亞細胞定位，以精確確定其逃逸時間窗口。隨後，在逃逸的關鍵時間點，將使用Ce6光活化鄰近標記技術，在時空上標記LNP附近的宿主蛋白，並通過質譜分析鑑定交互作用蛋白群。通過比較高逃逸和低逃逸LNP的差異交互作用蛋白，篩選候選調控蛋白。最後，將使用CRISPR-Cas9基因敲除技術驗證關鍵蛋白在LNP溶酶體逃逸中的功能作用。 **預期結論：** 本研究預期建立LNP脂質組成與溶酶體逃逸效率之間的直接關聯圖，揭示影響逃逸效率的關鍵脂質化學特徵。首次在溶酶體逃逸的精確時空節點上捕獲LNP與宿主蛋白之間的動態交互作用網絡，並鑑定出介導或阻礙逃逸過程的幾個關鍵宿主因子（例如，特定的膜融合蛋白、脂質轉運蛋白或離子通道）。這些發現將闡明LNP溶酶體逃逸的分子機制，為高效遞送系統的合理設計提供理論基礎和新的工程靶點，並促進核酸藥物遞送技術的發展。