提示詞描述

2.2 闡明重樓皂苷III作用於不同亞型乳癌細胞的關鍵分子機制。 ① 基於先前的敏感性差異結果，選擇四種細胞株：MCF-7 (Luminal A)、BT-474 (Luminal B)、SK-BR-3 (HER2-enriched) 和 MDA-MB-231 (TNBC)。利用 RNA-seq 技術，系統性地比較每種亞型在重樓皂苷III處理前後的轉錄組變化。重點關注細胞凋亡、氧化壓力和亞型特異性訊號通路（如 ER、HER2、STAT3）的富集，並篩選出關鍵的差異表達基因。結合西方墨點法和 qRT-PCR 驗證候選靶標（如 Bcl-2 家族成員、NOXA、PUMA、EGFR、p-STAT3 等）的表達變化，並鑑定出每種亞型中反應最顯著的核心效應分子。② 針對每種亞型的主要機制進行功能干預實驗：在 TNBC 細胞中，設置對照組、重樓皂苷III組、NAC（ROS 清除劑）組和重樓皂苷III + NAC 組，以檢測細胞凋亡（Cleaved Caspase-3/PARP）、ROS 水平、粒線體膜電位和 JNK/p38 磷酸化狀態。在 HER2⁺ 細胞中，設置對照組、重樓皂苷III組和 HER2 過表達/敲除組，以評估 HER2-AKT/ERK 通路活性和細胞存活率。在 Luminal A 細胞中，結合 ER 抑制劑（fulvestrant）或 ERα siRNA，觀察是否逆轉耐藥性。同時，通過 Annexin V/PI 流式細胞儀、細胞週期分析和劃痕/Transwell 實驗評估功能表型變化。③ 構建關鍵節點基因（如 HIF-1α、STAT3 或 HER2）的穩定敲除或過表達細胞株，以驗證它們在重樓皂苷III誘導的細胞死亡、訊號抑制和表型變化中的必要性，並檢測相關蛋白的泛素化或亞細胞定位變化，從而建立驅動每種亞型藥效差異的核心分子機制軸。