Описание промпта

Создайте техническую дорожную карту, упрощающую и систематизирующую описания экспериментов для ясности. Тема – изучение механизма даунрегуляции 14-3-3β при гипоксическом стрессе клеток плоскоклеточного рака пищевода (ПРПП) и его роли в прогрессировании ПРПП. 1. Подтвердите взаимосвязь между HIF1A и 14-3-3β. Соответствующие эксперименты включают изменения HIF1A и 14-3-3β при различных концентрациях COCL2 и времени индукции, изменения уровней мРНК 14-3-3β после индукции и изменения 14-3-3β после нокдауна HIF1A и добавления ингибитора HIF1A PX-478. 2. Фенотипическая валидация 14-3-3β в клетках ПРПП, включая MTT-анализы, qPCR и анализ формирования колоний. 3. Исследуйте взаимосвязь между 14-3-3β и митохондриями, включая изменения в определении АФК, уровнях аутофагии, митохондриальном мембранном потенциале и уровнях АТФ. 4. Изучите взаимосвязь между 14-3-3β и ETFA, включая ко-ИП, выделение митохондрий, нуклеоцитоплазматическое разделение и ко-ИП митохондриальных и цитоплазматических белков. 5. Выясните механизм действия 14-3-3β и ETFA и их влияние на функцию митохондрий, включая изменения уровней белка и мРНК ETFA после нокдауна 14-3-3β, изменения уровней цитоплазматического ETFA, потребление кислорода митохондриями, изменения β-жирных кислот и изменения показателей, связанных с ферроптозом. 6. In vivo эксперименты: CDX и индукция ингибитором, изменения объема опухоли, IHC и тканевый микромассив.