Схематическая диаграмма, иллюстрирующая метаболические пути ферментации глюкозы и ацетата у Saccharomyces cerevisiae. В центре диаграммы представлено преобразование источников углерода, распределение редокс-зависимых ферментов и ключевые метаболические циклы, четко указывающие нативные пути, целевые сайты модификации и места интеграции гетерологичных ферментов. Основное отображаемое содержание: Нативные метаболические пути и ферменты (обозначены черным цветом): Четко представлен основной метаболический поток от глюкозы к этанолу, включая ключевые гликолитические ферменты, такие как гексокиназа (HXK), фосфоглюкозоизомераза (PGI) и фосфофруктокиназа (PFK), а также ключевые этанол-продуцирующие ферменты, такие как пируватдекарбоксилаза (PDC) и алкогольдегидрогеназа (ADH). Также указаны нативные пути ветвления для синтеза глицерина (связанные с GPD) и производства ацетата (связанные с ALD6). Целевые удаленные ферменты (желтый эллипс + красное обозначение "X"): Четко обозначены 4 фермента, выбитые с помощью CRISPR-Cas9: NADH-зависимая глицерин-3-фосфат дегидрогеназа 1 (GPD1), цитоплазматическая альдегиддегидрогеназа (ALD6) и митохондриальные внешние NADH дегидрогеназы 1 (NDE1) и 2 (NDE2), визуально демонстрирующие целевые сайты редактирования генов. Гетерологично экспрессируемые ферменты (обозначены красным цветом + желтый эллипс): Выделена ацетилирующая ацетальдегиддегидрогеназа (SeEutE), введенная из Salmonella enterica, разъясняющая ее роль в метаболическом пути и ее связь с превращением ацетил-КоА. Ключевые метаболические циклы (выделены синими прямоугольниками): "Бесполезный цикл ацетата" выделен синими прямоугольниками, четко определяющими рамки этого цикла в метаболическом пути и визуально представляющими бесполезный метаболический поток ацетальдегида, окисляющегося до ацетата через ALD6. Общая схематическая диаграмма использует цветовую дифференциацию и символическую нотацию для точного представления нативной метаболической сети, целей модификации генов и логики метаболического перепрограммирования после интеграции гетерологичных ферментов.
Использовалась сдвоенная система SHIME® (Симулятор Микробной...