
Позитивные трансформанты, успешно интегрированные с вектором CRISPR-редактирования, быстро и недеструктивно визуально отбираются посредством красной флуоресценции DsRed2. Впоследствии на растениях T0 проводится ПЦР с использованием праймеров 35S_F и Dm1_Cas9_304_R. Принцип и источник: 35S_F: Нацелен на промотор 35S вируса мозаики цветной капусты. Этот промотор управляет экспрессией гена SpCas9 и генов селективных маркеров (таких как NPTII, гигромицинфосфотрансфераза) на CRISPR-векторе. Dm1_Cas9_304_R: Нацелен на специфическую последовательность внутри гена SpCas9. Функция: Продукт амплификации этих праймеров предоставляет прямое доказательство успешной интеграции T-ДНК региона в геном растения. Положительный результат указывает на то, что растение является истинным трансформантом, а не ложноположительным, избежавшим отбора по устойчивости.
Сконструированная рекомбинантная плазмида вводится в штаммы-...