Шаг 1: Выбор платформы (штамм LAB) Цель: Выбрать хорошо охарактеризованный "шасси"-штамм, известный высокой продуктивностью и простотой манипулирования, обеспечивая максимальную эффективность последующих модификаций. Техническое преимущество: Используя последние полные геномные и мультиомиксные данные, мы модернизируем традиционную эмпирическую "удобную" платформу в оцифрованную модельную систему с прозрачной информацией, позволяющую осуществлять точное проектирование. (Сравнительная таблица морфологии ЭР) - Визуально демонстрирует прямые эффекты и основные принципы инженерии ЭР (модификации платформы). Шаг 2: Идентификация цели (ген CCT) Цель: Определить ключевой переключатель, контролирующий размер "производственного цеха" (эндоплазматического ретикулума). Увеличение производства SIgA включает оптимизацию среды для его сворачивания и сборки, а не прямое усиление его гена. Техническое преимущество: Демонстрирует возможности рационального проектирования. Основываясь на четком клеточно-биологическом принципе "синтез мембран - расширение ЭР", биоинформатика используется для точного определения ключевых регуляторных генов из массивных геномов, избегая слепого скрининга. (Список целей и мутантов) - Четко перечисляет три конкретных целевых гена (CCT1A, CCT1B, CCT2) и их идентификаторы генов, а также отображает мутанты с различными комбинациями. Шаг 3: Дизайн "ножниц" (gRNA) Цель: Выполнить точное редактирование "приобретения функции", а не "потери функции" на цели. Цель состоит в том, чтобы позволить клеткам непрерывно производить больше мембранных компонентов, тем самым естественным образом расширяя ЭР, а не убивая клетки. Техническое преимущество: Представляет точность и программируемость технологии редактирования генов CRISPR/Cas9. Разработка gRNA для разрезания между определенными доменами обеспечивает "тонкую настройку" функции белка, чего трудно достичь с помощью традиционной трансгенной перегрузки или методов выключения генов. (График верификации секвенирования редактирования генов) - Подтверждает точность и эффективность редактирования CRISPR в форме "молекулярных отпечатков пальцев".
Сконструированная рекомбинантная плазмида вводится в штаммы-...