Описание промпта

**Название:** Изучение взаимодействий белков клетки-хозяина, опосредующих лизосомальное высвобождение ЛНЧ, с использованием технологии проксимити-мечения. **Ключевые научные вопросы:** 1. Как липидные компоненты ЛНЧ специфически влияют на эффективность их лизосомального высвобождения? Существуют ли ключевые структурные особенности липидов, определяющие эффективность высвобождения? 2. Какие белки клетки-хозяина функционально взаимодействуют с ЛНЧ в критических пространственно-временных узлах лизосомального высвобождения? Как эти взаимодействующие белки опосредуют или препятствуют процессу высвобождения? **Методы исследования:** Сначала будет создана и протестирована многокомпонентная липидная библиотека в клетках LLC-luc с использованием репортерной системы Siluc для выявления ЛНЧ с "высоким" и "низким" высвобождением, значительно различающихся по эффективности лизосомального высвобождения. Субклеточная локализация ЛНЧ будет динамически отслеживаться с помощью конфокальной микроскопии для точного определения временного окна их высвобождения. Впоследствии, в критической точке времени высвобождения, будет использована фотоактивированная технология проксимити-мечения Ce6 для пространственно-временного мечения белков клетки-хозяина, находящихся вблизи ЛНЧ, а группы взаимодействующих белков будут идентифицированы с помощью масс-спектрометрического анализа. Кандидатные регуляторные белки будут отобраны путем сравнения дифференциальных взаимодействующих белков ЛНЧ с высоким и низким высвобождением. Наконец, технология нокаута генов CRISPR-Cas9 будет использована для проверки функциональной роли ключевых белков в лизосомальном высвобождении ЛНЧ. **Ожидаемые выводы:** Ожидается, что это исследование установит прямую корреляцию между липидным составом ЛНЧ и эффективностью лизосомального высвобождения, выявив ключевые химические особенности липидов, влияющие на эффективность высвобождения. Впервые будет захвачена динамическая сеть взаимодействий между ЛНЧ и белками клетки-хозяина в точном пространственно-временном узле лизосомального высвобождения, и будут идентифицированы несколько ключевых факторов клетки-хозяина (таких как специфические белки слияния мембран, белки переноса липидов или ионные каналы), которые опосредуют или препятствуют процессу высвобождения. Эти результаты прояснят молекулярный механизм лизосомального высвобождения ЛНЧ, обеспечат теоретическую основу и новые инженерные цели для рационального проектирования эффективных систем доставки и будут способствовать развитию технологии доставки нуклеиновых кислот.