Описание промпта

2.2 Выяснить ключевые молекулярные механизмы действия полифиллина III на различные подтипы клеток рака молочной железы. ① На основании предыдущих результатов по различиям в чувствительности, выбрать четыре клеточные линии: MCF-7 (Luminal A), BT-474 (Luminal B), SK-BR-3 (HER2-обогащенный) и MDA-MB-231 (TNBC). Используя технологию RNA-seq, систематически сравнить изменения транскриптома каждого подтипа до и после обработки полифиллином III. Сосредоточиться на обогащении апоптозом, окислительным стрессом и подтип-специфическими сигнальными путями (такими как ER, HER2, STAT3) и провести скрининг ключевых дифференциально экспрессирующихся генов. Объединить Western blotting и qRT-PCR для проверки изменений экспрессии генов-кандидатов (таких как члены семейства Bcl-2, NOXA, PUMA, EGFR, p-STAT3 и т. д.) и идентифицировать основные эффекторные молекулы с наиболее значительным ответом в каждом подтипе. ② Провести эксперименты по функциональному вмешательству, нацеленные на доминирующие механизмы каждого подтипа: в TNBC создать контрольную группу, группу полифиллина III, группу NAC (поглотитель ROS) и группу полифиллина III + NAC для определения апоптоза (Cleaved Caspase-3/PARP), уровней ROS, митохондриального мембранного потенциала и статуса фосфорилирования JNK/p38. В HER2⁺ клетках создать контрольную группу, группу полифиллина III и группу с сверхэкспрессией/нокдауном HER2 для оценки активности пути HER2-AKT/ERK и скорости выживания клеток. В клетках Luminal A объединить ингибиторы ER (фулвестрант) или ERα siRNA, чтобы наблюдать, происходит ли обращение лекарственной устойчивости. Одновременно оценить функциональные фенотипические изменения с помощью проточной цитометрии Annexin V/PI, анализа клеточного цикла и экспериментов scratch/Transwell. ③ Создать стабильные клеточные линии с нокаутом или сверхэкспрессией ключевых генов-узлов (таких как HIF-1α, STAT3 или HER2), чтобы проверить их необходимость в индуцированной полифиллином III гибели клеток, ингибировании сигнала и фенотипических изменениях, и определить связанные изменения убиквитинирования белка или субклеточной локализации, тем самым установив основную молекулярную ось механизма, определяющую различия в эффективности лекарственного средства в каждом подтипе.