Descrição do Prompt

Gere um roteiro técnico que simplifique e organize as descrições experimentais para maior clareza. O tema é o estudo do mecanismo de downregulation de 14-3-3β no estresse hipóxico de células de carcinoma espinocelular de esôfago (CECE) e seu papel na promoção da progressão do CECE. 1. Confirmar a relação entre HIF1A e 14-3-3β. Experimentos relacionados incluem mudanças em HIF1A e 14-3-3β sob diferentes concentrações de COCL2 e tempos de indução, mudanças nos níveis de mRNA de 14-3-3β após a indução e mudanças em 14-3-3β após o knockdown de HIF1A e adição do inibidor de HIF1A PX-478. 2. Validação fenotípica de 14-3-3β em células de CECE, incluindo ensaios de MTT, qPCR e ensaios de formação de colônias. 3. Investigar a relação entre 14-3-3β e mitocôndrias, incluindo mudanças na detecção de ROS, níveis de autofagia, potencial de membrana mitocondrial e níveis de ATP. 4. Examinar a relação entre 14-3-3β e ETFA, incluindo co-IP, isolamento mitocondrial, separação nucleocitoplasmática e co-IP de proteínas mitocondriais e citoplasmáticas. 5. Elucidar o mecanismo de ação de 14-3-3β e ETFA e seu impacto na função mitocondrial, incluindo mudanças nos níveis de proteína e mRNA de ETFA após o knockdown de 14-3-3β, mudanças nos níveis de ETFA citoplasmática, consumo de oxigênio mitocondrial, mudanças em β-ácidos graxos e mudanças em indicadores relacionados à ferroptose. 6. Experimentos in vivo: CDX e indução por inibidor, mudanças no volume do tumor, IHC e microarray de tecido.