Descrição do Prompt

O processo geral para extração e purificação de insulina humana recombinante a partir de corpos de inclusão de E. coli é o seguinte: Primeiramente, corpos de inclusão contendo a proteína de fusão pró-insulina são obtidos através de fermentação e expressão induzida. Subsequentemente, as células são lisadas, e os corpos de inclusão são recuperados, seguidos por lavagem para remover impurezas. Em seguida, os corpos de inclusão são dissolvidos usando uma alta concentração de desnaturante (como ureia) e submetidos a sulfitólise oxidativa para manter a pró-insulina em um estado não enovelado e prevenir a formação incorreta de ligações dissulfeto. Então, o peptídeo de fusão N-terminal é clivado usando brometo de cianogênio (CNBr). Isso é seguido por troca de tampão para remover reagentes da reação. A pró-insulina é então purificada por métodos cromatográficos (como troca iônica, cromatografia de fase reversa, etc.) e/ou métodos como precipitação por pH e cristalização com zinco. Após a purificação, o renaturamento é realizado para restaurar sua conformação nativa. Subsequentemente, o peptídeo C é removido por digestão enzimática usando tripsina e carboxipeptidase B, gerando a estrutura de insulina de duas cadeias biologicamente ativa. Finalmente, etapas adicionais de purificação cromatográfica e formulação são realizadas para obter insulina humana recombinante de alta pureza ou produtos análogos.