Descrição do Prompt

O plasmídeo recombinante construído é introduzido em linhagens hospedeiras de E. coli. Linhagens hospedeiras comuns como BL21(DE3) ou DH5α são usadas, e o plasmídeo recombinante é introduzido nas células bacterianas via choque térmico ou eletroporação. Após o plasmídeo entrar nas células, a solução bacteriana é cultivada, e colônias resistentes são selecionadas para confirmar a transformação bem-sucedida. Subsequentemente, a linhagem recombinante é cultivada em larga escala em um meio nutritivo. Durante a fase de expressão, um indutor é adicionado para iniciar a expressão da proteína. Por exemplo, o IPTG, comumente usado, pode induzir a expressão eficiente de genes que carregam o promotor T7; métodos de produção antigos também usavam o promotor triptofano (promotor trp), que expressa automaticamente o precursor da insulina após a depleção de triptofano. Em resumo, otimizando as condições de expressão e as formulações do meio de cultura, altos níveis de cadeia A e cadeia B da insulina (ou proteína precursora) podem ser obtidos em E. coli.