Descrição do Prompt

A preparação da insulina humana recombinante começa com o design e a síntese do gene da insulina humana. A insulina humana consiste em duas cadeias peptídicas, A e B; portanto, dois genes sintéticos são tipicamente projetados: um codificando a cadeia A e outro codificando a cadeia B. Pesquisadores otimizam códons preferidos por *E. coli* com base na sequência natural de aminoácidos da insulina e sintetizam quimicamente esses dois segmentos de gene. Em seguida, enzimas de restrição são usadas para inserir o gene da cadeia A ou da cadeia B em um plasmídeo vetor, construindo um plasmídeo de expressão recombinante. O plasmídeo também precisa conter elementos funcionais, como promotores e terminadores, e marcadores de resistência a antibióticos para alcançar transcrição e seleção eficientes do gene. Vetores de expressão comumente usados geralmente carregam promotores fortes (como promotores T7 ou triptofano) e RBS para impulsionar a expressão em alto nível do gene inserido na bactéria hospedeira. Aqui, os genes A e B são clonados separadamente em plasmídeos circulares. Como mostrado na ilustração, o gene da pró-insulina (contendo sequências das cadeias A e B) é extraído do núcleo celular no canto superior esquerdo; o plasmídeo circular aberto com enzimas de restrição está no canto superior direito, e o vetor contém um promotor e um gene de resistência. Após a reação enzimática, o gene da cadeia A e o gene da cadeia B são ligados em diferentes sítios no plasmídeo, formando um plasmídeo recombinante para expressão downstream.