
Transformantes positivos, que foram integrados com sucesso ao vetor de edição CRISPR, são rastreados visualmente de forma rápida e não destrutiva via fluorescência vermelha DsRed2. Subsequentemente, PCR é realizado em plantas T0 usando os primers 35S_F e Dm1_Cas9_304_R. Princípio e Fonte: 35S_F: Alvo do promotor 35S do vírus do mosaico da couve-flor. Este promotor direciona a expressão do gene SpCas9 e genes marcadores selecionáveis (como NPTII, higromicina fosfotransferase) no vetor CRISPR. Dm1_Cas9_304_R: Alvo de uma sequência específica dentro do gene SpCas9. Função: O produto de amplificação desses primers fornece evidência direta da integração bem-sucedida da região T-DNA no genoma da planta. Um resultado positivo indica que a planta é um transformante verdadeiro, em vez de um falso positivo que escapou da triagem de resistência.
O plasmídeo recombinante construído é introduzido em linhage...