Passo 1: Seleção da Plataforma (Cepa LAB) Objetivo: Selecionar uma cepa "chassis" bem caracterizada, conhecida por alta produtividade e facilidade de manipulação, garantindo máxima eficiência em modificações subsequentes. Vantagem Técnica: Aproveitando o genoma completo mais recente e dados multi-ômicos, atualizamos a plataforma empírica tradicional "amigável ao usuário" para um sistema de modelo digitalizado com informações transparentes, permitindo um design preciso. (Gráfico de Comparação da Morfologia do RE) - Demonstra visualmente os efeitos diretos e os princípios básicos da engenharia do RE (modificação da plataforma). Passo 2: Identificação do Alvo (Gene CCT) Objetivo: Identificar o interruptor chave que controla o tamanho da "oficina de produção" (retículo endoplasmático). Aumentar a produção de SIgA envolve otimizar o ambiente para seu dobramento e montagem, em vez de amplificar diretamente seu gene. Vantagem Técnica: Demonstra a capacidade de design racional. Com base no princípio claro da biologia celular de "síntese de membrana - expansão do RE", a bioinformática é usada para localizar precisamente genes reguladores chave de genomas massivos, evitando a triagem cega. (Lista de Alvos e Mutantes) - Lista claramente três genes alvo específicos (CCT1A, CCT1B, CCT2) e seus IDs de gene, e exibe mutantes com diferentes combinações. Passo 3: Design das "Tesouras" (gRNA) Objetivo: Realizar uma edição precisa de "ganho de função" em vez de "perda de função" no alvo. O objetivo é permitir que as células produzam continuamente mais componentes de membrana, expandindo assim naturalmente o RE, em vez de matar as células. Vantagem Técnica: Representa a precisão e a programabilidade da tecnologia de edição de genes CRISPR/Cas9. Projetar gRNAs para cortar entre domínios específicos alcança o "ajuste fino" da função da proteína, o que é difícil de alcançar com sobrecarga transgênica tradicional ou técnicas de nocaute de genes. (Gráfico de Verificação do Sequenciamento da Edição de Genes) - Confirma a precisão e a eficácia da edição CRISPR na forma de "impressões digitais moleculares".
O plasmídeo recombinante construído é introduzido em linhage...