1. Representação da Cena Central Gere um diagrama esquemático em formato paisagem com um estilo de ilustração vetorial científica, mostrando claramente o princípio de funcionamento de um sistema modular de edição de genes CRISPR-Cas9 para plantas. 2. Descrição Detalhada da Cena (por módulo) Módulo 1: Vetor Plasmídeo (pDV003 - Esquerda) Desenhe um plasmídeo circular grande. Rotule o módulo "Promotor Pol II (CmYLCV)" no anel, estendendo uma longa cadeia de RNA horizontal (transcrito policistrônico) a partir dele. Na cadeia de RNA, destaque duas sequências alvo em vermelho vivo e laranja vivo, rotuladas como "gRNA: G5" e "gRNA: G4.2" respectivamente. Cada sequência alvo é flanqueada por marcadores de clivagem únicos (como diamantes ou buracos de fechadura), representando "sítios de reconhecimento Csy4". Abaixo do anel do plasmídeo, desenhe um "cassete de expressão do gene repórter" separado contendo os ícones "promotor FMV34S" e "mCherry direcionado para cloroplasto". Rotule a região "Sítio AarI & gene de seleção negativa ccdB" na parte inferior do plasmídeo. Módulo 2: Processamento Csy4 e Maturação do gRNA (Meio) Ao lado da cadeia de RNA, desenhe uma proteína azul ou verde em forma de "tesoura molecular", rotulada como "ribonuclease Csy4". Mostre claramente Csy4 cortando nos dois sítios de reconhecimento, clivando precisamente a longa cadeia de RNA para liberar dois gRNAs de fita simples independentes e completos. Módulo 3: Otimização da Estrutura do sgRNA em Close-up (Meio - Moldura de Lupa) Adicione uma moldura de close-up no estilo de lupa a um dos gRNAs liberados. Dentro da moldura, compare lado a lado: Esquerda (Padrão): Uma estrutura simples de alça-tronco curta, com a nota "sgRNA Padrão" e sequência "TTTT". Direita (Otimizado): Uma estrutura com uma alça-tronco significativamente mais longa, com a nota "sgRNA Otimizado (Dang et al.)". Indique "extensão da região de fita dupla (+5 pb)" e "mutação chave (T→C)" com setas e texto. Módulo 4: Complexo Cas9 e Edição de Genes (Direita) Desenhe um modelo estrutural claro da proteína SpCas9 (montagem multi-domínio). Mostre um gRNA otimizado ligando-se ao Cas9 para formar um "complexo ribonucleoproteico Cas9/gRNA (RNP)". Desenhe duas hélices duplas de DNA genômico azuis paralelas, rotuladas com os pontos alvo "Locus Genômico G5" e "Locus Genômico G4.2". Mostre o complexo Cas9 ligando-se ao alvo de DNA e criando uma "quebra de fita dupla de DNA (DSB)" a montante da sequência PAM (indicada por uma quebra ou símbolo de raio). 3. Estilo e Requisitos Visuais Estilo geral: Ilustração vetorial científica simples, semi-realista, com linhas claras e estrutura precisa. Esquema de cores: Use esquemas de cores de periódicos acadêmicos. Recomenda-se usar azul para DNA e RNA.
1. Extrair DNA de folhas. 2. Realizar PCR em plantas T0 usan...