
1. 동물 모델 구축 및 그룹 투여 1.1 모델링 시약 준비 소 II형 콜라겐: 면역원성 천연 구조를 가진 콜라겐, 순도 > 95%의 동결 건조 분말. Complete Freund's Adjuvant 빙초산: 분석 등급, 콜라겐 용매. 1.2 동물 선택 및 윤리 Wistar 암컷 쥐, 6-8주령, 체중 160-200g을 선택함 (Wistar 쥐는 콜라겐 유발 관절염에 더 민감하고 발생률이 높음. Wistar 쥐를 구할 수 없는 경우 SD 쥐를 대체하여 사용할 수 있음). 그룹당 10-12마리의 쥐를 사용하며, 모델 실패 가능성을 고려하여 모델링 그룹 수를 적절히 늘릴 수 있음. SPF 등급 동물실, 온도 22±2°C, 상대 습도 55±5%, 12시간 명암 주기, 7일간 적응 사육. 동물 실험 시작 전에 윤리적 승인을 받아야 함. 1.3 CIA 모델 유도 프로토콜 a. 콜라겐 용액 준비: 멸균 조건 하에서 소 II형 콜라겐 동결 건조 분말을 0.05 M 또는 0.1 M 빙초산에 최종 농도 2 mg/mL로 용해시킴. 이 단계는 4°C에서 밤새 천천히 교반하면서 수행해야 하며, 콜라겐 변성을 방지하기 위해 격렬하게 흔들지 않도록 함. 용해된 콜라겐 용액은 맑고 투명하거나 약간 유백색이어야 함. b. 에멀젼 준비: 얼음물 조건 하에서 콜라겐 용액과 동일한 부피의 Complete Freund's Adjuvant를 혼합하고 유화시킴 (고속 조직 균질기 사용 또는 세 방향 밸브를 통해 두 개의 유리 주사기로 반복적으로 밀고 당김). c. 초기 면역: 쥐를 흡입 마취 (이소플루란) 후, 등을 털을 깎고 소독함. 주사 부위: 꼬리 뿌리 등쪽 부위에 피내 다점 주사. d. 추가 면역: 초기 면역 후 7일 후에 초기 면역과 동일한 용량으로 추가 면역을 실시하며, 원래 주사 부위를 피함. 1.4 그룹화 및 투여 프로토콜 쥐는 초기 면역 후 10-14일 후에 관절 발적 및 부종 증상을 보이기 시작함. 이때 쥐는 관절염 점수 또는 체중에 따라 무작위로 그룹화하여 그룹 간 기본 일관성을 확보함. 용담 추출물은 100 mg/kg 용량에서 유의미한 항염증 효과를 보였음. 명확한 용량-반응 관계를 관찰하고 대사 조절의 임계값을 포괄하기 위해 100, 200, 400 mg/kg의 세 가지 농도 구배를 설계함. 추출물은 0.5% 카르복시메틸 셀룰로오스 나트륨 용액에 현탁하여 모델링 후 14일부터 투여를 시작하여 42일까지 28일 동안 지속함. 그룹 샘플 크기 약물 용량 투여 경로/빈도 대조군 10 0.9% 생리 식염수 또는 0.5% CMC-Na 동일 부피 경구 투여/매일 1회 모델 그룹 12 위와 동일 동일 부피 경구 투여/매일 1회 양성 대조군 10 메토트렉세이트 3mg/kg 경구 투여/주 2회 저용량 용담 그룹 10 용담 에탄올 추출물 100mg/kg 경구 투여/매일 1회 중간 용량 용담 그룹 10 용담 에탄올 추출물 200mg/kg 경구 투여/매일 1회 고용량 용담 그룹 10 용담 에탄올 추출물 400mg/kg 경구 투여/매일 1회 2. 약력학적 평가 섹션 2.1 관절염 점수 및 부종 정도 (육안적)
목표: 본 연구는 다차원 분석을 통합하는 혁신적인 프레임워크를 개발하고 검증하는 것을 목표로 한다. 집중적인...