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식도 편평 세포암(ESCC) 세포의 저산소 스트레스에서 14-3-3β의 하향 조절 메커니즘과 ESCC 진행 촉진 역할 연구를 위한 실험 설명을 명확하게 단순화하고 체계화하는 기술 로드맵을 생성합니다. 1. HIF1A와 14-3-3β의 관계를 확인합니다. 관련 실험에는 다양한 COCL2 농도 및 유도 시간 하에서 HIF1A 및 14-3-3β의 변화, 유도 후 14-3-3β mRNA 수준의 변화, HIF1A 녹다운 및 HIF1A 억제제 PX-478 첨가 후 14-3-3β의 변화가 포함됩니다. 2. ESCC 세포에서 14-3-3β의 표현형 검증 (MTT 분석, qPCR, 콜로니 형성 분석 포함). 3. 14-3-3β와 미토콘드리아의 관계를 조사합니다 (ROS 검출, 자가포식 수준, 미토콘드리아 막 전위 및 ATP 수준의 변화 포함). 4. 14-3-3β와 ETFA의 관계를 조사합니다 (Co-IP, 미토콘드리아 분리, 핵세포질 분리, 미토콘드리아 및 세포질 단백질의 Co-IP 포함). 5. 14-3-3β와 ETFA의 작용 메커니즘과 미토콘드리아 기능에 미치는 영향을 밝힙니다 (14-3-3β 녹다운 후 ETFA 단백질 및 mRNA 수준의 변화, 세포질 ETFA 수준의 변화, 미토콘드리아 산소 소비, β-지방산의 변화, 철분 과잉사멸 관련 지표의 변화 포함). 6. 생체 내 실험: CDX 및 억제제 유도, 종양 부피 변화, IHC 및 조직 마이크로어레이.