
대장균 봉입체로부터 재조합 인간 인슐린을 추출 및 정제하는 전체 과정은 다음과 같다: 먼저, 프로인슐린 융합 단백질을 함유한 봉입체를 발효 및 유도 발현을 통해 얻는다. 이어서, 세포를 용해하고 봉입체를 회수하며, 불순물을 제거하기 위해 세척한다. 다음으로, 고농도의 변성제 (예: 요소)를 사용하여 봉입체를 용해하고, 산화적 아황산 분해를 수행하여 프로인슐린을 펼쳐진 상태로 유지하고 잘못된 이황화 결합 형성을 방지한다. 그런 다음, 시아노겐 브로마이드 (CNBr)를 사용하여 N-말단 융합 펩타이드를 절단한다. 이후, 반응 시약을 제거하기 위해 완충액 교환을 수행한다. 프로인슐린은 이온 교환, 역상 크로마토그래피 등과 같은 크로마토그래피 방법 및/또는 pH 침전 및 아연 결정화와 같은 방법으로 정제된다. 정제 후, 고유한 입체 구조를 복원하기 위해 리폴딩을 수행한다. 이어서, 트립신 및 카르복시펩티다제 B를 사용한 효소 소화를 통해 C-펩타이드를 제거하여 생물학적으로 활성적인 두 사슬 인슐린 구조를 생성한다. 마지막으로, 고순도 재조합 인간 인슐린 또는 유사체 제품을 얻기 위해 추가적인 크로마토그래피 정제 및 제형 단계를 수행한다.