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2.2 폴리필린 III가 다양한 유방암 세포 아형에 작용하는 주요 분자 메커니즘을 규명하시오. ① 기존의 감수성 차이 결과를 바탕으로 MCF-7 (Luminal A), BT-474 (Luminal B), SK-BR-3 (HER2-enriched), MDA-MB-231 (TNBC)의 네 가지 세포주를 선택한다. RNA-seq 기술을 사용하여 폴리필린 III 처리 전후 각 아형의 전사체 변화를 체계적으로 비교한다. 세포 사멸, 산화 스트레스, 아형 특이적 신호 전달 경로 (예: ER, HER2, STAT3)의 농축에 초점을 맞추고 주요 차등 발현 유전자를 스크리닝한다. 웨스턴 블로팅 및 qRT-PCR을 결합하여 후보 표적 (예: Bcl-2 family members, NOXA, PUMA, EGFR, p-STAT3 등)의 발현 변화를 검증하고 각 아형에서 가장 유의미한 반응을 보이는 핵심 효과 분자를 식별한다. ② 각 아형의 주요 메커니즘을 표적으로 하는 기능적 중재 실험을 수행한다. TNBC에서는 대조군, 폴리필린 III 군, NAC (ROS 소거제) 군, 폴리필린 III + NAC 군을 설정하여 세포 사멸 (Cleaved Caspase-3/PARP), ROS 수준, 미토콘드리아 막 전위, JNK/p38 인산화 상태를 검출한다. HER2⁺ 세포에서는 대조군, 폴리필린 III 군, HER2 과발현/녹다운 군을 설정하여 HER2-AKT/ERK 경로 활성 및 세포 생존율을 평가한다. Luminal A 세포에서는 ER 억제제 (fulvestrant) 또는 ERα siRNA를 병용하여 약물 내성이 역전되는지 관찰한다. 동시에 Annexin V/PI 유세포 분석, 세포 주기 분석, 스크래치/Transwell 실험을 통해 기능적 표현형 변화를 평가한다. ③ 주요 노드 유전자 (예: HIF-1α, STAT3 또는 HER2)의 안정적인 녹아웃 또는 과발현 세포주를 구축하여 폴리필린 III 유도 세포 사멸, 신호 억제 및 표현형 변화에 대한 필요성을 검증하고 관련 단백질 유비퀴틴화 또는 세포 내 위치 변화를 검출하여 각 아형에서 약물 효능 차이를 유발하는 핵심 분자 메커니즘 축을 확립한다.