Promptの説明

大腸菌封入体からの組換えヒトインスリンの抽出・精製全体の流れ：まず、発酵と誘導発現によりプロインスリン融合タンパク質を含む封入体を得る。次に、細胞を溶解し、封入体を回収後、洗浄して不純物を除去する。続いて、高濃度の変性剤（尿素など）を用いて封入体を溶解し、酸化スルフィトリシスを行い、プロインスリンをアンフォールド状態に保ち、誤ったジスルフィド結合の形成を防ぐ。その後、シアン化ブロミド（CNBr）を用いてN末端融合ペプチドを切断する。次に、反応試薬を除去するためにバッファー交換を行う。プロインスリンは、クロマトグラフィー法（イオン交換、逆相クロマトグラフィーなど）および/またはpH沈殿や亜鉛結晶化などの方法により精製される。精製後、ネイティブな立体構造を回復させるためにリフォールディングを行う。続いて、トリプシンおよびカルボキシペプチダーゼBを用いた酵素消化によりCペプチドを除去し、生物学的に活性な二本鎖インスリン構造を生成する。最後に、さらなるクロマトグラフィー精製および製剤化のステップを行い、高純度の組換えヒトインスリンまたはアナログ製品を得る。