
陽性株取得後、大規模な発酵培養を行う。組換えインスリン生産では、一般的に高密度発酵が用いられる。発酵槽内では、温度、pH、溶存酸素を制御し、細胞成長を促進するために栄養素を供給する。誘導時期は、発現ベクターの設計に応じて発酵プロセス中に調整可能である。例えば、細胞密度が一定レベルに達した時点でIPTGを添加して発現を誘導したり、プロモーター自己制御発現系を使用したりする。制御戦略は最終的な収量に影響を与える。 専門的なバイオリアクターを使用することで、無菌環境とパラメータを制御し、収量を最大化できる。文献によると、大腸菌の発酵では、培養液1リットルあたり数百ミリグラムのインスリン鎖を生産できると報告されている。さらに、発酵制御は阻害物質の生成を抑制し、組換えタンパク質の収量と純度を向上させることができる。
構築された組換えプラスミドを大腸菌宿主株に導入する。BL21(DE3)やDH5αなどの一般的な宿主株を使用し、組換えプラ...