Promptの説明

構築された組換えプラスミドを大腸菌宿主株に導入する。BL21(DE3)やDH5αなどの一般的な宿主株を使用し、組換えプラスミドをヒートショックまたはエレクトロポレーションによって細菌細胞に導入する。プラスミドが細胞に入った後、細菌溶液を培養し、薬剤耐性コロニーを選択して形質転換の成功を確認する。その後、組換え株を栄養培地中で大規模に培養する。 発現段階では、誘導物質を添加してタンパク質発現を開始させる。例えば、一般的に使用されるIPTGは、T7プロモーターを持つ遺伝子の効率的な発現を誘導できる。初期の生産方法では、トリプトファンプロモーター（trpプロモーター）も使用され、トリプトファンが枯渇するとインスリン前駆体が自動的に発現する。要するに、発現条件と培養培地の組成を最適化することで、大腸菌内で高レベルのインスリンA鎖およびB鎖（または前駆体タンパク質）を得ることができる。