Promptの説明

**タイトル:** 近接標識技術を用いたLNPリソソーム脱出を媒介する宿主タンパク質相互作用の解剖 **主要な科学的疑問:** 1. LNPの脂質成分は、どのようにリソソーム脱出効率に特異的に影響を与えるのか？脱出効率を決定する主要な脂質構造的特徴は何か？ 2. リソソーム脱出の重要な時空間ノードにおいて、どの宿主細胞タンパク質がLNPと機能的に相互作用するのか？これらの相互作用タンパク質は、脱出プロセスをどのように媒介または阻害するのか？ **研究方法:** まず、多成分脂質ライブラリーを構築し、Silucレポーターシステムを用いてLLC-luc細胞でスクリーニングを行い、リソソーム脱出効率が有意に異なる「高脱出」および「低脱出」LNPを特定する。LNPの細胞内局在を共焦点顕微鏡を用いて動的に追跡し、脱出時間窓を正確に決定する。続いて、脱出の重要な時点において、Ce6光活性化近接標識技術を用いて、LNPに近接する宿主タンパク質を時空間的に標識し、相互作用するタンパク質群を質量分析法により同定する。高脱出LNPと低脱出LNPの差次的相互作用タンパク質を比較することにより、候補となる調節タンパク質をスクリーニングする。最後に、CRISPR-Cas9遺伝子ノックアウト技術を用いて、LNPリソソーム脱出における主要タンパク質の機能的役割を検証する。 **期待される結論:** 本研究は、LNP脂質組成とリソソーム脱出効率との間の直接的な相関マップを確立し、脱出効率に影響を与える主要な脂質化学的特徴を明らかにすることが期待される。リソソーム脱出の正確な時空間ノードにおいて、LNPと宿主タンパク質との間の動的な相互作用ネットワークを初めて捉え、脱出プロセスを媒介または阻害するいくつかの主要な宿主因子（特定の膜融合タンパク質、脂質輸送タンパク質、またはイオンチャネルなど）を特定する。これらの発見は、LNPリソソーム脱出の分子メカニズムを解明し、効率的な送達システムの合理的な設計のための理論的根拠と新たなエンジニアリングターゲットを提供し、核酸医薬送達技術の発展を促進する。