Promptの説明

2.2 ポリフィリンIIIが異なるサブタイプの乳がん細胞に作用する主要な分子メカニズムを解明する。 ① 過去の感受性差異の結果に基づき、MCF-7（Luminal A）、BT-474（Luminal B）、SK-BR-3（HER2過剰発現）、MDA-MB-231（TNBC）の4つの細胞株を選択する。RNA-seq技術を用いて、ポリフィリンIII処理の前後で各サブタイプのトランスクリプトーム変化を系統的に比較する。アポトーシス、酸化ストレス、およびサブタイプ特異的なシグナル伝達経路（ER、HER2、STAT3など）のエンリッチメントに焦点を当て、重要な発現変動遺伝子をスクリーニングする。ウェスタンブロッティングおよびqRT-PCRを組み合わせて、候補標的（Bcl-2ファミリーメンバー、NOXA、PUMA、EGFR、p-STAT3など）の発現変化を検証し、各サブタイプで最も有意な応答を示すコアエフェクター分子を特定する。② 各サブタイプの主要なメカニズムを標的とした機能的介入実験を実施する。TNBCでは、コントロール群、ポリフィリンIII群、NAC（ROSスカベンジャー）群、およびポリフィリンIII + NAC群を設定し、アポトーシス（Cleaved Caspase-3/PARP）、ROSレベル、ミトコンドリア膜電位、およびJNK/p38のリン酸化状態を検出する。HER2⁺細胞では、コントロール群、ポリフィリンIII群、およびHER2過剰発現/ノックダウン群を設定し、HER2-AKT/ERK経路の活性と細胞生存率を評価する。Luminal A細胞では、ER阻害剤（フルベストラント）またはERα siRNAを組み合わせて、薬剤耐性が逆転するかどうかを観察する。同時に、Annexin V/PIフローサイトメトリー、細胞周期分析、およびスクラッチ/Transwell実験を通じて、機能的な表現型変化を評価する。③ 主要なノード遺伝子（HIF-1α、STAT3、またはHER2など）の安定的なノックアウトまたは過剰発現細胞株を構築し、ポリフィリンIII誘導性細胞死、シグナル阻害、および表現型変化におけるそれらの必要性を検証し、関連するタンパク質のユビキチン化または細胞内局在の変化を検出し、それにより、各サブタイプにおける薬効の違いを駆動するコア分子メカニズム軸を確立する。