Descrizione del prompt

Genera una roadmap tecnica che semplifichi e organizzi le descrizioni sperimentali per chiarezza. Il tema è lo studio del meccanismo di downregulation di 14-3-3β nello stress ipossico delle cellule di carcinoma squamocellulare esofageo (ESCC) e il suo ruolo nella promozione della progressione dell'ESCC. 1. Conferma la relazione tra HIF1A e 14-3-3β. Gli esperimenti correlati includono cambiamenti in HIF1A e 14-3-3β sotto diverse concentrazioni di COCL2 e tempi di induzione, cambiamenti nei livelli di mRNA di 14-3-3β dopo l'induzione e cambiamenti in 14-3-3β dopo il knockdown di HIF1A e l'aggiunta dell'inibitore di HIF1A PX-478. 2. Validazione fenotipica di 14-3-3β nelle cellule ESCC, inclusi saggi MTT, qPCR e saggi di formazione di colonie. 3. Indaga la relazione tra 14-3-3β e i mitocondri, inclusi i cambiamenti nel rilevamento di ROS, i livelli di autofagia, il potenziale di membrana mitocondriale e i livelli di ATP. 4. Esamina la relazione tra 14-3-3β e ETFA, inclusi co-IP, isolamento mitocondriale, separazione nucleocitoplasmatica e co-IP di proteine mitocondriali e citoplasmatiche. 5. Elucida il meccanismo d'azione di 14-3-3β e ETFA e il loro impatto sulla funzione mitocondriale, inclusi i cambiamenti nei livelli di proteina e mRNA di ETFA dopo il knockdown di 14-3-3β, i cambiamenti nei livelli di ETFA citoplasmatico, il consumo di ossigeno mitocondriale, i cambiamenti negli acidi grassi β e i cambiamenti negli indicatori correlati alla ferroptosi. 6. Esperimenti in vivo: CDX e induzione di inibitori, cambiamenti nel volume del tumore, IHC e microarray tissutale.