Descrizione del prompt

Il plasmide ricombinante costruito viene introdotto in ceppi ospiti di E. coli. Si utilizzano ceppi ospiti comuni come BL21(DE3) o DH5α, e il plasmide ricombinante viene introdotto nelle cellule batteriche tramite shock termico o elettroporazione. Dopo che il plasmide entra nelle cellule, la soluzione batterica viene coltivata e vengono selezionate colonie resistenti per confermare la trasformazione avvenuta con successo. Successivamente, il ceppo ricombinante viene coltivato su larga scala in un terreno di coltura. Durante la fase di espressione, viene aggiunto un induttore per avviare l'espressione proteica. Ad esempio, l'IPTG, comunemente utilizzato, può indurre l'espressione efficiente di geni che portano il promotore T7; i primi metodi di produzione utilizzavano anche il promotore del triptofano (promotore trp), che esprime automaticamente il precursore dell'insulina dopo l'esaurimento del triptofano. In sintesi, ottimizzando le condizioni di espressione e le formulazioni del terreno di coltura, si possono ottenere alti livelli di catena A e catena B dell'insulina (o proteina precursore) in E. coli.