Descrizione del prompt

La preparazione dell'insulina umana ricombinante inizia con la progettazione e la sintesi del gene dell'insulina umana. L'insulina umana è costituita da due catene peptidiche, A e B; pertanto, vengono tipicamente progettati due geni sintetici: uno che codifica per la catena A e uno che codifica per la catena B. I ricercatori ottimizzano i codoni preferiti da *E. coli* in base alla sequenza amminoacidica naturale dell'insulina e sintetizzano chimicamente questi due segmenti genici. Quindi, gli enzimi di restrizione vengono utilizzati per inserire il gene della catena A o della catena B in un plasmide vettore, costruendo un plasmide di espressione ricombinante. Il plasmide deve anche contenere elementi funzionali come promotori e terminatori, e marcatori di resistenza agli antibiotici per ottenere una trascrizione e una selezione genica efficienti. I vettori di espressione comunemente usati generalmente portano promotori forti (come i promotori T7 o del triptofano) e RBS per guidare l'espressione ad alto livello del gene inserito nel batterio ospite. Qui, i geni A e B vengono clonati separatamente in plasmidi circolari. Come mostrato nell'illustrazione, il gene della proinsulina (contenente le sequenze delle catene A e B) viene estratto dal nucleo cellulare in alto a sinistra; il plasmide circolare aperto con enzimi di restrizione è in alto a destra e il vettore contiene un promotore e un gene di resistenza. Dopo la reazione enzimatica, il gene della catena A e il gene della catena B vengono ligati in siti diversi sul plasmide, formando un plasmide ricombinante per l'espressione a valle.