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Ibridazione di mutanti di Nicotiana benthamiana per produ... | SciDraw Gallery

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Ibridazione di mutanti di Nicotiana benthamiana per produrre mutanti omozigoti.

Biomedico

Descrizione del prompt

Ibridazione di mutanti di Nicotiana benthamiana per produrre mutanti omozigoti.

Illustrazioni correlate

Rappresentazione schematica di quattro geni chiave coinvolti nelle vie di detossificazione e stress ossidativo associate alla suscettibilità al cancro alla prostata. La figura evidenzia TXNRD2 come il principale gene candidato, coinvolto nell'omeostasi redox mitocondriale e nel controllo dei danni ossidativi, mostrando evidenza di associazione in una coorte di replicazione indipendente. NFE2L2 (NRF2) è raffigurato come il regolatore principale della risposta antiossidante; la ridotta espressione nel tessuto tumorale prostatico porta a una compromessa attivazione dei geni citoprotettivi. ARNT è mostrato come cofattore trascrizionale nella detossificazione di xenobiotici e nelle vie correlate all'ipossia, potenzialmente influenzando l'angiogenesi e la riprogrammazione metabolica nel cancro alla prostata. GPX6 è incluso come selenoproteina coinvolta nella detossificazione del perossido e nella segnalazione redox, con un ruolo più esplorativo nel cancro alla prostata. Nel complesso, la figura illustra la convergenza di questi geni sul controllo dello stress ossidativo e sui processi di detossificazione rilevanti per il cancro alla prostata.

Rappresentazione schematica di quattro geni chiave coinvolti...

Il plasmide ricombinante costruito viene introdotto in ceppi ospiti di E. coli. Si utilizzano ceppi ospiti comuni come BL21(DE3) o DH5α, e il plasmide ricombinante viene introdotto nelle cellule batteriche tramite shock termico o elettroporazione. Dopo che il plasmide entra nelle cellule, la soluzione batterica viene coltivata e vengono selezionate colonie resistenti per confermare la trasformazione avvenuta con successo. Successivamente, il ceppo ricombinante viene coltivato su larga scala in un terreno di coltura.

Durante la fase di espressione, viene aggiunto un induttore per avviare l'espressione proteica. Ad esempio, l'IPTG, comunemente utilizzato, può indurre l'espressione efficiente di geni che portano il promotore T7; i primi metodi di produzione utilizzavano anche il promotore del triptofano (promotore trp), che esprime automaticamente il precursore dell'insulina dopo l'esaurimento del triptofano. In sintesi, ottimizzando le condizioni di espressione e le formulazioni del terreno di coltura, si possono ottenere alti livelli di catena A e catena B dell'insulina (o proteina precursore) in E. coli.

Il plasmide ricombinante costruito viene introdotto in ceppi...

La preparazione dell'insulina umana ricombinante inizia con la progettazione e la sintesi del gene dell'insulina umana. L'insulina umana è costituita da due catene peptidiche, A e B; pertanto, vengono tipicamente progettati due geni sintetici: uno che codifica per la catena A e uno che codifica per la catena B. I ricercatori ottimizzano i codoni preferiti da *E. coli* in base alla sequenza amminoacidica naturale dell'insulina e sintetizzano chimicamente questi due segmenti genici. Quindi, gli enzimi di restrizione vengono utilizzati per inserire il gene della catena A o della catena B in un plasmide vettore, costruendo un plasmide di espressione ricombinante. Il plasmide deve anche contenere elementi funzionali come promotori e terminatori, e marcatori di resistenza agli antibiotici per ottenere una trascrizione e una selezione genica efficienti. I vettori di espressione comunemente usati generalmente portano promotori forti (come i promotori T7 o del triptofano) e RBS per guidare l'espressione ad alto livello del gene inserito nel batterio ospite.

Qui, i geni A e B vengono clonati separatamente in plasmidi circolari. Come mostrato nell'illustrazione, il gene della proinsulina (contenente le sequenze delle catene A e B) viene estratto dal nucleo cellulare in alto a sinistra; il plasmide circolare aperto con enzimi di restrizione è in alto a destra e il vettore contiene un promotore e un gene di resistenza. Dopo la reazione enzimatica, il gene della catena A e il gene della catena B vengono ligati in siti diversi sul plasmide, formando un plasmide ricombinante per l'espressione a valle.

La preparazione dell'insulina umana ricombinante inizia con ...

Progressi nelle neuroscienze.

Progressi nelle neuroscienze....