1. Descrizione della Scena Principale Genera un diagramma schematico in formato orizzontale con uno stile di illustrazione vettoriale scientifica, che mostri chiaramente il principio di funzionamento di un sistema modulare di editing genetico CRISPR-Cas9 per piante. 2. Descrizione Dettagliata della Scena (per modulo) Modulo 1: Vettore Plasmidico (pDV003 - Sinistra) Disegna un grande plasmide circolare. Etichetta il modulo "Promotore Pol II (CmYLCV)" sull'anello, estendendo da esso una lunga catena di RNA orizzontale (trascritto policistronico). Sulla catena di RNA, evidenzia due sequenze bersaglio in rosso vivo e arancione vivo, etichettate rispettivamente come "gRNA: G5" e "gRNA: G4.2". Ogni sequenza bersaglio è fiancheggiata da marcatori di clivaggio unici (come diamanti o buchi della serratura), che rappresentano "siti di riconoscimento Csy4". Sotto l'anello del plasmide, disegna una "cassetta di espressione del gene reporter" separata contenente il "promotore FMV34S" e le icone "mCherry mirato al cloroplasto". Etichetta la regione "Sito AarI & gene di selezione negativa ccdB" nella parte inferiore del plasmide. Modulo 2: Processazione Csy4 e Maturazione del gRNA (Centro) Accanto alla catena di RNA, disegna una proteina blu o verde a forma di "forbici molecolari", etichettata come "ribonucleasi Csy4". Mostra chiaramente Csy4 che taglia i due siti di riconoscimento, scindendo precisamente la lunga catena di RNA per rilasciare due gRNA a singolo filamento completi e indipendenti. Modulo 3: Ottimizzazione della Struttura sgRNA - Primo Piano (Centro - Cornice a Lente d'Ingrandimento) Aggiungi una cornice in stile lente d'ingrandimento a uno dei gRNA rilasciati. All'interno della cornice, confronta fianco a fianco: Sinistra (Standard): Una semplice struttura a stelo-ansa corta, con la nota "sgRNA Standard" e la sequenza "TTTT". Destra (Ottimizzato): Una struttura con uno stelo-ansa significativamente più lungo, con la nota "sgRNA Ottimizzato (Dang et al.)". Indica "estensione della regione a doppio filamento (+5 bp)" e "mutazione chiave (T→C)" con frecce e testo. Modulo 4: Complesso Cas9 e Editing Genetico (Destra) Disegna un modello strutturale chiaro della proteina SpCas9 (assemblaggio multi-dominio). Mostra un gRNA ottimizzato che si lega a Cas9 per formare un "complesso ribonucleoproteico Cas9/gRNA (RNP)". Disegna due doppie eliche di DNA genomico blu parallele, etichettate con i punti bersaglio "Locus Genomico G5" e "Locus Genomico G4.2". Mostra il complesso Cas9 che si lega al bersaglio del DNA e crea una "rottura a doppio filamento del DNA (DSB)" a monte della sequenza PAM (indicata da una rottura o un simbolo di fulmine). 3. Stile e Requisiti Visivi Stile generale: Illustrazione vettoriale scientifica semplice, semi-realistica con linee chiare e struttura precisa. Schema colori: Utilizza schemi di colori da rivista accademica. Si consiglia di utilizzare il blu per DNA e RNA.
1. Estrai il DNA dalle foglie. 2. Esegui la PCR sulle piante...