Descrizione del prompt

**Titolo:** Dissezione delle Interazioni Proteiche dell'Ospite che Mediano la Fuga Lisosomiale delle LNP Utilizzando la Tecnologia di Marcatura di Prossimità **Domande Scientifiche Chiave:** 1. In che modo i componenti lipidici delle LNP influenzano specificamente la loro efficienza di fuga lisosomiale? Esistono caratteristiche strutturali lipidiche chiave che determinano l'efficienza di fuga? 2. Quali proteine della cellula ospite interagiscono funzionalmente con le LNP nei nodi spazio-temporali critici della fuga lisosomiale? In che modo queste proteine interagenti mediano o ostacolano il processo di fuga? **Metodi di Ricerca:** Innanzitutto, verrà costruita e vagliata una libreria lipidica multicomponente in cellule LLC-luc utilizzando il sistema reporter Siluc per identificare LNP a "fuga alta" e "fuga bassa" con efficienze di fuga lisosomiale significativamente diverse. La localizzazione subcellulare delle LNP sarà monitorata dinamicamente utilizzando la microscopia confocale per determinare con precisione la loro finestra temporale di fuga. Successivamente, nel punto temporale critico della fuga, verrà utilizzata la tecnologia di marcatura di prossimità fotoattivata con Ce6 per marcare spazio-temporalmente le proteine dell'ospite prossime alle LNP e i gruppi di proteine interagenti saranno identificati mediante analisi di spettrometria di massa. Le proteine regolatrici candidate saranno selezionate confrontando le proteine interagenti differenziali delle LNP a fuga alta e bassa. Infine, la tecnologia di knockout genico CRISPR-Cas9 sarà utilizzata per verificare il ruolo funzionale delle proteine chiave nella fuga lisosomiale delle LNP. **Conclusioni Attese:** Si prevede che questo studio stabilirà una mappa di correlazione diretta tra la composizione lipidica delle LNP e l'efficienza di fuga lisosomiale, rivelando le caratteristiche chimiche lipidiche chiave che influenzano l'efficienza di fuga. Per la prima volta, la rete di interazione dinamica tra le LNP e le proteine dell'ospite sarà catturata nel preciso nodo spazio-temporale della fuga lisosomiale e saranno identificati diversi fattori chiave dell'ospite (come specifiche proteine di fusione della membrana, proteine di trasferimento lipidico o canali ionici) che mediano o ostacolano il processo di fuga. Questi risultati chiariranno il meccanismo molecolare della fuga lisosomiale delle LNP, forniranno una base teorica e nuovi obiettivi di ingegneria per la progettazione razionale di sistemi di delivery efficienti e promuoveranno lo sviluppo della tecnologia di delivery di farmaci a base di acidi nucleici.