Description du prompt

Générer une feuille de route technique qui simplifie et organise les descriptions expérimentales pour plus de clarté. Le thème est l'étude du mécanisme de régulation négative de la protéine 14-3-3β dans le stress hypoxique des cellules de carcinome épidermoïde de l'œsophage (CEEO) et son rôle dans la promotion de la progression du CEEO. 1. Confirmer la relation entre HIF1A et 14-3-3β. Les expériences connexes comprennent les changements de HIF1A et 14-3-3β sous différentes concentrations de COCL2 et différents temps d'induction, les changements des niveaux d'ARNm de 14-3-3β après induction, et les changements de 14-3-3β après l'inhibition de HIF1A et l'ajout de l'inhibiteur de HIF1A PX-478. 2. Validation phénotypique de 14-3-3β dans les cellules CEEO, y compris les tests MTT, la qPCR et les tests de formation de colonies. 3. Étudier la relation entre 14-3-3β et les mitochondries, y compris les changements dans la détection des ROS, les niveaux d'autophagie, le potentiel membranaire mitochondrial et les niveaux d'ATP. 4. Examiner la relation entre 14-3-3β et ETFA, y compris la co-IP, l'isolement mitochondrial, la séparation nucléocytoplasmique et la co-IP des protéines mitochondriales et cytoplasmiques. 5. Élucider le mécanisme d'action de 14-3-3β et ETFA et leur impact sur la fonction mitochondriale, y compris les changements dans les niveaux de protéines et d'ARNm d'ETFA après l'inhibition de 14-3-3β, les changements dans les niveaux d'ETFA cytoplasmique, la consommation d'oxygène mitochondriale, les changements dans les acides β-gras et les changements dans les indicateurs liés à la ferroptose. 6. Expériences in vivo : CDX et induction d'inhibiteurs, changements du volume tumoral, IHC et micro-réseau tissulaire.