
Le processus global d'extraction et de purification de l'insuline humaine recombinante à partir de corps d'inclusion d'E. coli est le suivant : Premièrement, les corps d'inclusion contenant la protéine de fusion proinsuline sont obtenus par fermentation et expression induite. Ensuite, les cellules sont lysées et les corps d'inclusion sont récupérés, puis lavés pour éliminer les impuretés. Puis, les corps d'inclusion sont dissous à l'aide d'une forte concentration de dénaturant (tel que l'urée) et soumis à une sulfitolyse oxydative pour maintenir la proinsuline dans un état déplié et empêcher la formation incorrecte de liaisons disulfure. Ensuite, le peptide de fusion N-terminal est clivé à l'aide de bromure de cyanogène (CNBr). Ceci est suivi d'un échange de tampon pour éliminer les réactifs de la réaction. La proinsuline est ensuite purifiée par des méthodes chromatographiques (telles que l'échange d'ions, la chromatographie en phase inverse, etc.) et/ou des méthodes telles que la précipitation par pH et la cristallisation au zinc. Après purification, un repliement est effectué pour restaurer sa conformation native. Par la suite, le peptide C est éliminé par digestion enzymatique à l'aide de trypsine et de carboxypeptidase B, générant la structure d'insuline à deux chaînes biologiquement active. Enfin, d'autres étapes de purification chromatographique et de formulation sont effectuées pour obtenir de l'insuline humaine recombinante de haute pureté ou des produits analogues.
Après une chirurgie de pontage gastrique Roux-en-Y (RYGB), l...