Description du prompt
La préparation de l'insuline humaine recombinante commence par la conception et la synthèse du gène de l'insuline humaine. L'insuline humaine est constituée de deux chaînes peptidiques, A et B ; par conséquent, deux gènes synthétiques sont généralement conçus : un codant pour la chaîne A et un codant pour la chaîne B. Les chercheurs optimisent les codons préférés par *E. coli* en se basant sur la séquence naturelle d'acides aminés de l'insuline et synthétisent chimiquement ces deux segments de gène. Ensuite, des enzymes de restriction sont utilisées pour insérer le gène de la chaîne A ou de la chaîne B dans un plasmide vecteur, construisant ainsi un plasmide d'expression recombinant. Le plasmide doit également contenir des éléments fonctionnels tels que des promoteurs et des terminateurs, ainsi que des marqueurs de résistance aux antibiotiques pour permettre une transcription et une sélection efficaces du gène. Les vecteurs d'expression couramment utilisés portent généralement des promoteurs forts (tels que les promoteurs T7 ou tryptophane) et un RBS pour piloter l'expression à haut niveau du gène inséré dans la bactérie hôte. Ici, les gènes A et B sont clonés séparément dans des plasmides circulaires. Comme le montre l'illustration, le gène de la proinsuline (contenant les séquences des chaînes A et B) est extrait du noyau cellulaire en haut à gauche ; le plasmide circulaire ouvert avec des enzymes de restriction se trouve en haut à droite, et le vecteur contient un promoteur et un gène de résistance. Après la réaction enzymatique, le gène de la chaîne A et le gène de la chaîne B sont ligaturés à différents sites sur le plasmide, formant un plasmide recombinant pour l'expression en aval.
