
Les transformants positifs, qui ont été intégrés avec succès au vecteur d'édition CRISPR, sont rapidement et non destructivement criblés visuellement via la fluorescence rouge DsRed2. Par la suite, une PCR est effectuée sur les plantes T0 en utilisant les amorces 35S_F et Dm1_Cas9_304_R. Principe et Source : 35S_F : Cible le promoteur 35S du virus de la mosaïque du chou-fleur. Ce promoteur dirige l'expression du gène SpCas9 et des gènes marqueurs de sélection (tels que NPTII, hygromycine phosphotransférase) sur le vecteur CRISPR. Dm1_Cas9_304_R : Cible une séquence spécifique au sein du gène SpCas9. Fonction : Le produit d'amplification de ces amorces fournit une preuve directe de l'intégration réussie de la région T-DNA dans le génome de la plante. Un résultat positif indique que la plante est un véritable transformant, plutôt qu'un faux positif qui a échappé au criblage de résistance.
Le plasmide recombinant construit est introduit dans des sou...