Étape 1 : Sélection de la plateforme (souche LAB) Objectif : Sélectionner une souche "châssis" bien caractérisée, reconnue pour sa haute productivité et sa facilité de manipulation, assurant une efficacité maximale lors des modifications ultérieures. Avantage technique : En exploitant les données complètes les plus récentes du génome et les données multi-omiques, nous transformons la plateforme empirique traditionnelle "conviviale" en un système de modèle numérisé avec des informations transparentes, permettant une conception précise. (Tableau comparatif de la morphologie du RE) - Démontre visuellement les effets directs et les principes fondamentaux de l'ingénierie du RE (modification de la plateforme). Étape 2 : Identification de la cible (gène CCT) Objectif : Identifier l'interrupteur clé contrôlant la taille de "l'atelier de production" (réticulum endoplasmique). L'amélioration de la production de SIgA implique l'optimisation de l'environnement pour son repliement et son assemblage plutôt que l'amplification directe de son gène. Avantage technique : Démontre la capacité de conception rationnelle. Basée sur le principe clair de biologie cellulaire de "synthèse membranaire - expansion du RE", la bio-informatique est utilisée pour localiser précisément les gènes régulateurs clés à partir de génomes massifs, évitant ainsi le criblage aveugle. (Liste des cibles et des mutants) - Liste clairement trois gènes cibles spécifiques (CCT1A, CCT1B, CCT2) et leurs identifiants de gènes, et affiche les mutants avec différentes combinaisons. Étape 3 : Conception des "ciseaux" (gRNA) Objectif : Effectuer une édition précise de "gain de fonction" plutôt que de "perte de fonction" sur la cible. Le but est de permettre aux cellules de produire continuellement plus de composants membranaires, élargissant ainsi naturellement le RE, plutôt que de tuer les cellules. Avantage technique : Représente la précision et la programmabilité de la technologie d'édition de gènes CRISPR/Cas9. La conception de gRNAs pour couper entre des domaines spécifiques permet un "ajustement fin" de la fonction protéique, ce qui est difficile à réaliser avec les techniques traditionnelles de surcharge transgénique ou d'inactivation de gènes. (Tableau de vérification du séquençage de l'édition génique) - Confirme la précision et l'efficacité de l'édition CRISPR sous la forme d'"empreintes moléculaires".
Le plasmide recombinant construit est introduit dans des sou...