Description du prompt

**Titre :** Dissection des interactions protéiques de l'hôte médiant l'échappement lysosomal des LNP par la technologie de marquage de proximité **Questions scientifiques clés :** 1. Comment les composants lipidiques des LNP influencent-ils spécifiquement leur efficacité d'échappement lysosomal ? Existe-t-il des caractéristiques structurales lipidiques clés qui déterminent l'efficacité de l'échappement ? 2. Quelles protéines de la cellule hôte interagissent fonctionnellement avec les LNP aux nœuds spatiotemporels critiques de l'échappement lysosomal ? Comment ces protéines interagissantes médient-elles ou entravent-elles le processus d'échappement ? **Méthodes de recherche :** Premièrement, une bibliothèque lipidique multi-composants sera construite et criblée dans des cellules LLC-luc en utilisant le système rapporteur Siluc pour identifier les LNP à "échappement élevé" et à "échappement faible" avec des efficacités d'échappement lysosomal significativement différentes. La localisation subcellulaire des LNP sera suivie dynamiquement par microscopie confocale pour déterminer précisément leur fenêtre temporelle d'échappement. Par la suite, au point temporel critique de l'échappement, la technologie de marquage de proximité photoactivée Ce6 sera utilisée pour marquer spatiotemporellement les protéines hôtes proches des LNP, et les groupes de protéines interagissantes seront identifiés par analyse de spectrométrie de masse. Les protéines régulatrices candidates seront criblées en comparant les protéines interagissantes différentielles des LNP à échappement élevé et faible. Enfin, la technologie d'extinction génique CRISPR-Cas9 sera utilisée pour vérifier le rôle fonctionnel des protéines clés dans l'échappement lysosomal des LNP. **Conclusions attendues :** Cette étude devrait établir une carte de corrélation directe entre la composition lipidique des LNP et l'efficacité de l'échappement lysosomal, révélant les caractéristiques chimiques lipidiques clés qui affectent l'efficacité de l'échappement. Pour la première fois, le réseau d'interaction dynamique entre les LNP et les protéines hôtes sera capturé au nœud spatiotemporel précis de l'échappement lysosomal, et plusieurs facteurs hôtes clés (tels que des protéines de fusion membranaire spécifiques, des protéines de transfert lipidique ou des canaux ioniques) qui médient ou entravent le processus d'échappement seront identifiés. Ces résultats élucideront le mécanisme moléculaire de l'échappement lysosomal des LNP, fourniront une base théorique et de nouvelles cibles d'ingénierie pour la conception rationnelle de systèmes de délivrance efficaces, et favoriseront le développement de la technologie de délivrance de médicaments à base d'acides nucléiques.