Description du prompt

2.2 Élucider les mécanismes moléculaires clés de l'action de la polyphylline III sur différents sous-types de cellules cancéreuses du sein. ① Sur la base des résultats antérieurs de différences de sensibilité, sélectionner quatre lignées cellulaires : MCF-7 (Luminal A), BT-474 (Luminal B), SK-BR-3 (enrichi en HER2) et MDA-MB-231 (TNBC). Utiliser la technologie RNA-seq pour comparer systématiquement les changements du transcriptome de chaque sous-type avant et après le traitement à la polyphylline III. Se concentrer sur l'enrichissement de l'apoptose, du stress oxydatif et des voies de signalisation spécifiques au sous-type (telles que ER, HER2, STAT3), et cribler les principaux gènes différentiellement exprimés. Combiner Western blotting et qRT-PCR pour vérifier les changements d'expression des cibles candidates (telles que les membres de la famille Bcl-2, NOXA, PUMA, EGFR, p-STAT3, etc.), et identifier les molécules effectrices centrales avec la réponse la plus significative dans chaque sous-type. ② Mener des expériences d'intervention fonctionnelle ciblant les mécanismes dominants de chaque sous-type : dans le TNBC, mettre en place un groupe témoin, un groupe polyphylline III, un groupe NAC (piégeur de ROS) et un groupe polyphylline III + NAC pour détecter l'apoptose (Caspase-3/PARP clivée), les niveaux de ROS, le potentiel membranaire mitochondrial et l'état de phosphorylation de JNK/p38. Dans les cellules HER2⁺, mettre en place un groupe témoin, un groupe polyphylline III et un groupe de surexpression/invalidation de HER2 pour évaluer l'activité de la voie HER2-AKT/ERK et le taux de survie cellulaire. Dans les cellules Luminal A, combiner des inhibiteurs d'ER (fulvestrant) ou des siRNA ERα pour observer si la résistance aux médicaments est inversée. Simultanément, évaluer les changements phénotypiques fonctionnels par cytométrie de flux Annexin V/PI, analyse du cycle cellulaire et expériences de scratch/Transwell. ③ Construire des lignées cellulaires stables invalidées ou surexprimant des gènes nodaux clés (tels que HIF-1α, STAT3 ou HER2) pour vérifier leur nécessité dans la mort cellulaire induite par la polyphylline III, l'inhibition du signal et les changements phénotypiques, et détecter l'ubiquitination des protéines associées ou les changements de localisation subcellulaire, établissant ainsi l'axe moléculaire central qui motive les différences d'efficacité du médicament dans chaque sous-type.