Descripción del prompt

1. Construcción del Modelo Animal y Administración de Grupos 1.1 Preparación de Reactivos para el Modelado Colágeno Bovino Tipo II: Colágeno con una estructura nativa inmunogénica, polvo liofilizado con una pureza > 95%. Adyuvante Completo de Freund Ácido Acético Glacial: Grado analítico, solvente del colágeno. 1.2 Selección Animal y Ética Se seleccionaron ratas hembra Wistar, de 6-8 semanas de edad, con un peso de 160-200g (las ratas Wistar son más sensibles a la artritis inducida por colágeno y tienen una alta tasa de incidencia. Si las ratas Wistar no están disponibles, se pueden usar ratas SD como sustituto). 10-12 ratas por grupo, con la posibilidad de fallo del modelo, el número de grupos de modelado se puede aumentar apropiadamente. Sala de animales de grado SPF, temperatura 22±2°C, humedad relativa 55±5%, ciclo de luz/oscuridad de 12h, alimentación adaptativa durante 7 días. Se debe obtener la aprobación ética antes del inicio de los experimentos con animales. 1.3 Protocolo de Inducción del Modelo CIA a. Preparación de la solución de colágeno: En condiciones estériles, disolver el polvo liofilizado de colágeno bovino tipo II en ácido acético glacial 0.05 M o 0.1 M hasta una concentración final de 2 mg/mL. Este paso debe realizarse a 4°C con agitación lenta durante la noche, evitando la agitación vigorosa para prevenir la desnaturalización del colágeno. La solución de colágeno disuelta debe ser clara y transparente o ligeramente opalescente. b. Preparación de la emulsión: En condiciones de baño de hielo, mezclar la solución de colágeno con un volumen igual de Adyuvante Completo de Freund y emulsionar (utilizando un homogeneizador de tejidos de alta velocidad o empujando y tirando repetidamente con dos jeringas de vidrio a través de una válvula de tres vías). c. Inmunización inicial: Después de que las ratas sean anestesiadas por inhalación (isoflurano), se afeita y desinfecta la espalda. Sitio de inyección: inyección intradérmica multipunto en el lado dorsal de la raíz de la cola. d. Inmunización de refuerzo: Se realiza una inmunización de refuerzo 7 días después de la inmunización inicial, con la misma dosis que la inmunización inicial, evitando el sitio de inyección original. 1.4 Protocolo de Agrupación y Administración Las ratas comienzan a mostrar síntomas de enrojecimiento e hinchazón de las articulaciones 10-14 días después de la inmunización inicial. En este momento, las ratas se agrupan aleatoriamente según la puntuación de artritis o el peso corporal para garantizar la consistencia de la línea de base entre los grupos. El extracto de Gentiana macrophylla ha demostrado tener efectos antiinflamatorios significativos a una dosis de 100 mg/kg. Para observar una clara relación dosis-respuesta y cubrir el umbral de la regulación metabólica, se diseñaron tres gradientes de 100, 200 y 400 mg/kg. El extracto debe suspenderse en una solución de carboximetilcelulosa sódica al 0,5% y administrarse a partir del día 14 después del modelado, continuando durante 28 días hasta el día 42. Grupo Tamaño de la Muestra Fármaco Dosis Vía/Frecuencia de Administración Grupo Control Blanco 10 Solución Salina al 0,9% o CMC-Na al 0,5% Volumen Igual Gavage/Una Vez al Día Grupo Modelo 12 Igual que el anterior Volumen Igual Gavage/Una Vez al Día Grupo Control Positivo 10 Metotrexato 3mg/kg Gavage/Dos Veces por Semana Grupo Gentiana macrophylla Dosis Baja 10 Extracto etanólico de Gentiana macrophylla 100mg/kg Gavage/Una Vez al Día Grupo Gentiana macrophylla Dosis Media 10 Extracto etanólico de Gentiana macrophylla 200mg/kg Gavage/Una Vez al Día Grupo Gentiana macrophylla D