Descripción del prompt

Generar una hoja de ruta técnica que simplifique y organice las descripciones experimentales para mayor claridad. El tema es el estudio del mecanismo de regulación a la baja de 14-3-3β en el estrés hipóxico de las células de carcinoma escamoso de esófago (ESCC) y su papel en la promoción de la progresión del ESCC. 1. Confirmar la relación entre HIF1A y 14-3-3β. Los experimentos relacionados incluyen cambios en HIF1A y 14-3-3β bajo diferentes concentraciones de COCL2 y tiempos de inducción, cambios en los niveles de ARNm de 14-3-3β después de la inducción y cambios en 14-3-3β después del silenciamiento de HIF1A y la adición del inhibidor de HIF1A PX-478. 2. Validación fenotípica de 14-3-3β en células ESCC, incluyendo ensayos MTT, qPCR y ensayos de formación de colonias. 3. Investigar la relación entre 14-3-3β y las mitocondrias, incluyendo cambios en la detección de ROS, los niveles de autofagia, el potencial de membrana mitocondrial y los niveles de ATP. 4. Examinar la relación entre 14-3-3β y ETFA, incluyendo co-IP, aislamiento mitocondrial, separación nucleocitoplasmática y co-IP de proteínas mitocondriales y citoplasmáticas. 5. Dilucidar el mecanismo de acción de 14-3-3β y ETFA y su impacto en la función mitocondrial, incluyendo cambios en los niveles de proteína y ARNm de ETFA después del silenciamiento de 14-3-3β, cambios en los niveles de ETFA citoplasmática, el consumo de oxígeno mitocondrial, los cambios en los β-ácidos grasos y los cambios en los indicadores relacionados con la ferroptosis. 6. Experimentos in vivo: CDX e inducción de inhibidores, cambios en el volumen del tumor, IHC y microarrays de tejido.