Descripción del prompt

El proceso general para la extracción y purificación de insulina humana recombinante a partir de cuerpos de inclusión de E. coli es el siguiente: Primero, los cuerpos de inclusión que contienen la proteína de fusión de proinsulina se obtienen mediante fermentación y expresión inducida. Posteriormente, las células se lisan y los cuerpos de inclusión se recuperan, seguidos de un lavado para eliminar impurezas. A continuación, los cuerpos de inclusión se disuelven utilizando una alta concentración de desnaturalizante (como urea) y se someten a sulfitólisis oxidativa para mantener la proinsulina en un estado desplegado y evitar la formación incorrecta de enlaces disulfuro. Luego, el péptido de fusión N-terminal se escinde utilizando bromuro de cianógeno (CNBr). A esto le sigue un intercambio de buffer para eliminar los reactivos de la reacción. La proinsulina se purifica entonces mediante métodos cromatográficos (como intercambio iónico, cromatografía de fase reversa, etc.) y/o métodos como la precipitación por pH y la cristalización con zinc. Después de la purificación, se realiza un replegamiento para restaurar su conformación nativa. Posteriormente, el péptido C se elimina mediante digestión enzimática utilizando tripsina y carboxipeptidasa B, generando la estructura de insulina de dos cadenas biológicamente activa. Finalmente, se realizan pasos adicionales de purificación cromatográfica y formulación para obtener insulina humana recombinante de alta pureza o productos análogos.