
Transformantes positivos, que se han integrado exitosamente con el vector de edición CRISPR, se seleccionan visualmente de forma rápida y no destructiva mediante la fluorescencia roja DsRed2. Posteriormente, se realiza PCR en plantas T0 utilizando los primers 35S_F y Dm1_Cas9_304_R. Principio y Origen: 35S_F: Se dirige al promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor. Este promotor impulsa la expresión del gen SpCas9 y los genes marcadores seleccionables (como NPTII, higromicina fosfotransferasa) en el vector CRISPR. Dm1_Cas9_304_R: Se dirige a una secuencia específica dentro del gen SpCas9. Función: El producto de amplificación de estos primers proporciona evidencia directa de la integración exitosa de la región T-DNA en el genoma de la planta. Un resultado positivo indica que la planta es un transformante verdadero, en lugar de un falso positivo que escapó a la selección de resistencia.
El plásmido recombinante construido se introduce en cepas hu...