1. Descripción de la Escena Central Genere un diagrama esquemático en formato horizontal con un estilo de ilustración vectorial científica, que muestre claramente el principio de funcionamiento de un sistema modular de edición genética CRISPR-Cas9 para plantas. 2. Descripción Detallada de la Escena (por módulo) Módulo 1: Vector Plásmido (pDV003 - Izquierda) Dibuje un plásmido circular grande. Etiquete el módulo "Promotor Pol II (CmYLCV)" en el anillo, extendiendo una larga cadena de ARN horizontal (transcrito policistrónico) desde él. En la cadena de ARN, resalte dos secuencias objetivo en rojo brillante y naranja brillante, etiquetadas como "gRNA: G5" y "gRNA: G4.2" respectivamente. Cada secuencia objetivo está flanqueada por marcadores de escisión únicos (como diamantes u ojales), que representan "sitios de reconocimiento Csy4". Debajo del anillo del plásmido, dibuje un "casete de expresión del gen reportero" separado que contenga el "promotor FMV34S" e iconos de "mCherry dirigido al cloroplasto". Etiquete la región "Sitio AarI y gen de selección negativa ccdB" en la parte inferior del plásmido. Módulo 2: Procesamiento Csy4 y Maduración del gRNA (Centro) Junto a la cadena de ARN, dibuje una proteína azul o verde con forma de "tijeras moleculares", etiquetada como "ribonucleasa Csy4". Muestre claramente el corte de Csy4 en los dos sitios de reconocimiento, escindiendo con precisión la larga cadena de ARN para liberar dos gRNAs monocatenarios completos e independientes. Módulo 3: Primer Plano de la Optimización de la Estructura del sgRNA (Centro - Marco de Lupa) Agregue un marco de primer plano estilo lupa a uno de los gRNAs liberados. Dentro del marco, compare lado a lado: Izquierda (Estándar): Una estructura simple de tallo-bucle corto, con la nota "sgRNA estándar" y la secuencia "TTTT". Derecha (Optimizado): Una estructura con un tallo-bucle significativamente más largo, con la nota "sgRNA optimizado (Dang et al.)". Indique "extensión de la región de doble cadena (+5 pb)" y "mutación clave (T→C)" con flechas y texto. Módulo 4: Complejo Cas9 y Edición Genética (Derecha) Dibuje un modelo estructural claro de la proteína SpCas9 (ensamblaje multidominio). Muestre un gRNA optimizado que se une a Cas9 para formar un "complejo ribonucleoproteico Cas9/gRNA (RNP)". Dibuje dos hélices dobles de ADN genómico azules paralelas, etiquetadas con los puntos objetivo "Locus Genómico G5" y "Locus Genómico G4.2". Muestre el complejo Cas9 uniéndose al ADN objetivo y creando una "rotura de doble cadena de ADN (DSB)" aguas arriba de la secuencia PAM (indicada por una rotura o un símbolo de rayo). 3. Estilo y Requisitos Visuales Estilo general: Ilustración vectorial científica simple, semirrealista, con líneas claras y estructura precisa. Esquema de color: Utilice esquemas de color de revistas académicas. Se recomienda utilizar el azul para el ADN y el ARN.
1. Extraer ADN de hojas. 2. Realizar PCR en plantas T0 utili...