Descripción del prompt

**Título:** Disección de las Interacciones de Proteínas del Huésped que Median el Escape Lisosomal de las LNP Utilizando la Tecnología de Marcaje por Proximidad **Preguntas Científicas Clave:** 1. ¿Cómo influyen específicamente los componentes lipídicos de las LNP en su eficiencia de escape lisosomal? ¿Existen características estructurales lipídicas clave que determinen la eficiencia del escape? 2. ¿Qué proteínas de la célula huésped interactúan funcionalmente con las LNP en los nodos espaciotemporales críticos del escape lisosomal? ¿Cómo median o dificultan estas proteínas interactuantes el proceso de escape? **Métodos de Investigación:** Primero, se construirá y se analizará una biblioteca de lípidos multicomponente en células LLC-luc utilizando el sistema reportero Siluc para identificar LNP de "alto escape" y "bajo escape" con eficiencias de escape lisosomal significativamente diferentes. La localización subcelular de las LNP se rastreará dinámicamente utilizando microscopía confocal para determinar con precisión su ventana de tiempo de escape. Posteriormente, en el punto de tiempo crítico del escape, se utilizará la tecnología de marcaje por proximidad fotoactivada con Ce6 para marcar espaciotemporalmente las proteínas del huésped próximas a las LNP, y los grupos de proteínas interactuantes se identificarán mediante análisis de espectrometría de masas. Las proteínas reguladoras candidatas se seleccionarán comparando las proteínas interactuantes diferenciales de las LNP de alto y bajo escape. Finalmente, se utilizará la tecnología de eliminación de genes CRISPR-Cas9 para verificar el papel funcional de las proteínas clave en el escape lisosomal de las LNP. **Conclusiones Esperadas:** Se espera que este estudio establezca un mapa de correlación directa entre la composición lipídica de las LNP y la eficiencia de escape lisosomal, revelando características químicas lipídicas clave que afectan la eficiencia del escape. Por primera vez, se capturará la red de interacción dinámica entre las LNP y las proteínas del huésped en el nodo espaciotemporal preciso del escape lisosomal, y se identificarán varios factores clave del huésped (como proteínas específicas de fusión de membrana, proteínas de transferencia de lípidos o canales iónicos) que median o dificultan el proceso de escape. Estos hallazgos elucidarán el mecanismo molecular del escape lisosomal de las LNP, proporcionarán una base teórica y nuevos objetivos de ingeniería para el diseño racional de sistemas de administración eficientes y promoverán el desarrollo de la tecnología de administración de fármacos de ácidos nucleicos.